خانه / جنگلداری -درخت شناسی / استخراج DNA در آزمایشگاه
استخراج DNA در آزمایشگاه

استخراج DNA در آزمایشگاه

       استخراج DNA در آزمایشگاه:

استخراج DNA در آزمایشگاه از برگ گیاهان علفی یا درختان صورت می گیرد. یک سلول گیاهی حاوی، چربی، کربوهیدرات ها، پروتئین ها و اسیدهای نوکلوئیک (RNA و DNA) می باشد.که باید همه این مواد را غیر از DNA حذف نماییم. برای این عملیات در آزمایشگاه از میکروتیوب استفاده می کنیم. و در این ظرف همه مواد غیر از DNA حذف خواهد شد.

یک نمونه برگی را  برای استخراج DNA انتخاب می کنیم، نمونه برگی بهتر است جوان بوده و در محیط آزمایشگاه کشت شده باشد. با ازت مایع که دارای دمای -۱۹۵ ˚c می باشد برگ را پودر می کنیم، با پودر کردن برگ در این دما دیواره سلولی برگ آسیب نمی بیند.

پس از پودر کردن برگ از بافر استخراج استفاده می نماییم، بافر استخراج شامل مواد زیر می باشد:

  • SDS یا سی تپ: که زداینده مواد چربی در برگ می باشد.
  • NaCl: باعث پایداری DNA در برابر شکستگی شده و نیز حذف کننده کربوهیدرات ها می باشد.
  • EDTA: از شکستگی DNA در برابر آنزیم DNaz مراقبت کرده و یون منیزیم جذب می کند.
  • Tris: حالت بافری به محلول می دهد و محلول را در برابر تغییرات pH، مقاوم می کند.

بافر استخراج دارای دمای ۶۵ ˚C می باشد.

محلول که حاوی پودر است به مدت ۳۰ دقیقه در دمای ۶۵ ˚C قرار می گیرد (در داخل حمام آب گرم یا بنماری)، این عمل باعث دناتوره شدن پروتئین ها می شود. برای این کار می توان از آنزیم پروتئیناز نیز استفاده کرد.

به محلول آزیم آرناز را نیز اضافه می کنیم، سپس محلول ایزوآمیل الکل و کلروفرم را به نسبت ۲۴ به ۱ آماده کرده و از آن ۵۰۰ میلی لیتر به محلول اضافه می نماییم. این عمل باعث رسوب پروتئین های دناتوره شده می گردد. سپس محلول را در سانتریفیوژ قرار می دهیم (۱۰۰۰۰ دور در دقیقه)، به مدت ۱۰ دقیقه و با دمای ۴ درجه سانتیگراد.

پس از این مدت، میکروتیوب را از دستگاه خارج می نماییم، محلول دارای سه قسمت می باشد، سطح بالایی مایعی زلال و دارای DNA، سطح بعدی پروتئین ها و سطح سوم مواد زائد گیاهی می باشند.

مایع زلال محلول را با سمپلر از میکروتیوب برمی داریم. در مرحله بعد باید DNA را رسوب دهیم، برای این کار از ایزوپروپانول با دمای -۲۰ ˚Cاستفاده میکنیم. سپس مجدداً محلول را در سانتیقیوژ قرار داده تا DNA رسوب کند. پس از اتمام این عمل میکروتیوب را از دستگاه خارج می کنیم، مایع زلالی در بالا و DNA نیز در سطح پایین ظرف رسوب می کند.

برای حذف NaCl که ممکن است در DNA وجود داشته باشد، از اتانول ۷۰% استفاده می کنیم.

درباره سید امین خسروی

من سید امین خسروی دانش آموخته مهندسی آبخیزداری از دانشگاه ارومیه هستم و این تارنما رو جهت فراهم آوردن مرجعی برای دانشجویان رشته های منابع طبیعی و محیط زیست و کشاورزی با تاکید بر رشته های مرتع و آبخیزداری و جنگلداری برپاکردم. خوشحال میشم با ارائه نظراتتون و لینک ادرس ما در وبلاگ وسایتتون و ارسال پاورپوینت و تحقیقات کلاسیتون به ایمیل ما ،مارو در هر چه بهتر شدن سایت یاری کنید. ادرس ایمیل سایت: aminkhosravi1471@gmail.com

پاسخ بدهید

ایمیلتان منتشر نمیشودفیلدهای الزامی علامت دار شده اند *

*

کد امنیتی مقابل را وارد نمایید * Time limit is exhausted. Please reload the CAPTCHA.

رفتن به بالا